实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time Quantitative polymerase chain reaction, qPCR)是通过内参或外参对样品中特定DNA分子进行相对定量分析的方法,常用于基因表达分析、基因突变检测及病原体检测等方面。在样本制备过程中,往往需要首先抽提RNA,反转录制备成cDNA文库。但对于大样本量及每个样本细胞数量较少的实验,例如培养在96孔板或384孔板内的细胞样品,很难利用传统方法抽提RNA。本案例介绍了一种无需提取RNA、在孔板内直接使用细胞裂解液进行快速反转录及qPCR的实验方法,并利用自动化移液工作站及高通量精密加样仪器实现了通量化操作。该方法适用于96/384孔板中的各种动物贴壁细胞。对微孔板内培养的细胞进行通量化RT-qPCR检测的实验体系能够为科研实验中常面临的多样本多基因筛查有效节省实验时间,同时也提高了实验稳定性。
王玮琪,韩帅,陈铭.对微孔板内培养的细胞进行通量化RT-qPCR检测[J].科研仪器案例成果数据库,2023,(0).