高分辨质谱中蛋白样品制备方法的改进

摘要:

超滤辅助样品制备法（Filter-aided sample preparation，FASP）是2009年以来广泛用于蛋白质谱样品前处理的方法之一，但该方法使用的超滤膜会非特异性吸附蛋白造成样品的损失。因此，该研究提出了一种改进后的FASP制样方法方法：通过对超滤膜表面进行接枝两性氨基酸的化学修饰方法，提高超滤膜表面亲水性以降低蛋白损失。以改进后的FASP方法制备人宫颈癌细胞（Hela）蛋白样品，并对样品进行了LC-MS/MS检测分析，比较了FASP方法、改进后FASP方法、溶液内酶解法鉴定到的肽和蛋白质总数，结果表明：相对于FASP方法，采用改进后的FASP方法鉴定到的蛋白质数量增加了7-9%，肽段数量增加了30-40%，结果与溶液内酶解方法相当，验证了改进后FASP方法的可行性。同时，确定了改进FASP方法的最佳蛋白柱载量为20 μg，LC-MS系统肽段最佳进样量为1-2 μL。通过对FASP方法的改进，蛋白质和肽段鉴定数量得到了提高。

关键词:蛋白样品前处理;超滤辅助样品制备;高分辨质谱;蛋白组学;亲水改性

Abstract:

Key words:蛋白样品前处理;超滤辅助样品制备;高分辨质谱;蛋白组学;亲水改性