纳升液相色谱-静电场轨道阱质谱法检测鹅膏菌属毒性相关内源性前体蛋白

摘要:

目的 建立纳升液相色谱-静电场轨道阱质谱法测定鹅膏菌属中 MSDIN 毒性相关前体蛋白的方法。方法 样品经纯水提取、超滤分离后, 采用 StageTips C18 进行样品除盐; 以 0.1%甲酸水溶液和含 0.1%甲酸的乙腈/水(4:1, V:V)溶液为流动相, 采用梯度洗脱方式, 经 Acclaim? PepMap? 100 C18 (70 mm×75 μm, 3 μm)预富集, Acclaim? PepMap? 100 C18 (150 mm×75 μm, 3 μm)分离, 采用电喷雾离子源正离子模式测定, Protein Discover 软件对蛋白质进行鉴定; 分别对蛋白提取液种类、蛋白质纯化方法和蛋白酶种类进行对比和优化。结果 优化前处理条件后选择纯水作为提取溶剂, 提取液经 Vivaspin Turbo 4 (3 kDa)分离纯化和 StageTips C18除盐后, 样品在非酶解状态下进行分析; 将本方法用于 2017—2020 年四川地区食物中毒事件中收集到的 23株鹅膏菌属类蘑菇, 共鉴定 MSDIN 毒性相关内源性前体蛋白 50 个; 与市售 8 种可食用蘑菇比较, 差异表达前体蛋白 41 个, 其中 13 条前体蛋白为全部 23 株鹅膏菌属类蘑菇共有, 可作为鹅膏菌属潜在的特征性靶标分子。结论 该方法简单快速、特异性强, 可作为形态学鉴定、DNA 测序和毒素检测的补充方法, 初步用于鹅膏菌属的快速识别。

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