固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中的烟酰胺单核苷酸α、β 异构体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

摘要:

目的 建立固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食品中烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide, NMN) α、β 异构体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide, NAD+)含量的方法。方法 样品经 5%甲醇水溶液超声提取, HLB 固相萃取柱和混合型阴离子交换固相萃取柱分别净化, 采用 Waters ACQUITY UPLC?HSS T 色谱柱进行分离, 流动相为 5 mmol/L 乙酸铵含 0.1% (V/V)甲酸水-甲醇, 梯度洗脱; 流速 0.2 mL/min; 柱温 30℃; 多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)模式定量分析, 定量离子对 NMN 为 m/z 335.0/123.0、 NAD+为 m/z 662.0/540.0。 结果 在最优条件下, α-NMN 和 β-NMN 两种异构体的分离度为 5.56。该方法中 α-NMN、 β-NMN 和 NAD+均在 10~1000 ng/mL 范围内线性良好, 相关系数分别为 0.9999, 0.9998 和 0.9995。 α-NMN、 β-NMN 和 NAD+的检出限分别为 4.0、 2.0 和 1.0 ng/mL, 定量限分别为 10.0、5.0 和 3.0 ng/mL, 回收率为 93.8%~103.8%, 相对标准偏差为 2.1%~6.5%。 结论 该方法灵敏度高、选择性好、结果准确可靠, 可同时快速检测各种基质食品中 NMN α、β 异构体和 NAD+的含量。

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