基于纳米抗体的可再生免疫亲和柱结合高效液相色谱-串联质谱法测定玉米中的黄曲霉毒素 B1

摘要:

目的 研究黄曲霉毒素 B1 (aflatoxin B1, AFB1)纳米抗体的表达产量的影响因素, 开发具有可再生性的AFB1 免疫亲和柱, 构建免疫亲和处理-高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLC-MS/MS)测定玉米中 AFB1 污染的分析方法。方法 研究诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度等对 AFB1 纳米抗体表达量的影响, 比对验证 AFB1 纳米抗体可再生免疫亲和柱的耐受性和可再生使用次数。使用 70%甲醇水溶液提取玉米样品中 AFB1, 提取液通过免疫亲和柱净化富集后进行 HPLC-MS/MS检测, 最后进行方 法学验证并应用到实际样品检测。结果 诱导 AFB1 纳米抗体表达的最优条件分别为诱导温度 16℃、诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷浓度 0.5 mmol/L、诱导时间 14 h, 在最优条件下产量可达 7.8mg/L。AFB1 纳米抗体具有良好灵敏度、 亲和性、 特异性和甲醇耐受性, 制备的 AFB1 免疫亲和柱具有极好的可再生性, 重复使用 150 次以上, 对AFB1 回收率仍可达 80%以上。同时, 建立的免疫亲和处理-HPLC-MS/MS, 在 0.1~100.0 μg/L 范围内呈现良好的线性关系, 检出限为 0.014 μg/L, 定量限为 0.047 μg/L。在 3 个不同加标浓度下, 回收率在 92.0%~104.1%, 变异系数小于3.9%。结论 本研究开发的 AFB1 纳米抗体免疫亲和柱表现出优秀的再生性和高特异性, 节约了检测成本, 建立的免疫亲和处理-HPLC-MS/MS 检测方法操作简便、回收率高、结果准确, 适用于实际玉米样品中 AFB1 的含量测定。

Abstract: